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包埋是使浸透蜡的组织块包裹在石蜡中。
6.切片:切片前先将蜡块切面在冻台上冷冻几分钟,将所要切的包埋块固定在标本台上,水曲柳木质部切片,使包埋块外切面与标本夹截面平行,并让包埋块稍露出一截。将刀台推至外缘后松开刀片夹的螺旋,上好刀片,使切片刀平面与组织切面间呈15°左右的夹角,包埋块上下边与刀口平行。
在微动装置上调节切片要求的厚度一般为4微米,调节时应注意指针不可在两个刻度之间,否则容易损伤切片机,将刀台移至近标本台处,让刀口与组织切面稍稍接触,这时就可以开始切片了。生物组织石蜡包埋切片是组织学切片技术中应用广泛的方法。 例如hematoxylin;h(a)ematine — 伊红染色法 (
hematoxylin-eosin staining ) ,简称he染色法 ,石蜡切片技术里常用的染色法之一 。hematoxylin;h(a)ematine 染液为碱性 ,主要使细胞核内的染色质与胞质内的---着紫蓝色 ;伊红为酸性染料 ,主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色 。he染色法是组织学、胚胎学、病理学教学与科研中基本、使用广泛的技术方法。
石蜡包埋切片实验基本步骤主要有以下几步:
1、取材:新鲜组织固定于4%---24h以上。将组织从固定液取出在通风橱内用手术刀将目的部位组织修平整,将修切好的组织和对应的标签放于脱水盒内。
2、脱水:将脱水盒放进吊篮里于脱水机内依次梯度酒精进行脱水。75%酒精4h-85%酒精2h-90%酒精2h-95%酒精1h-无水---i 30min-无水---ii 30min-醇---5-10min-i5-10min-ii5-10min-蜡i1h-蜡ii1h-蜡iii 1h。
3、包埋:将浸好蜡的组织于包埋机内进行包埋。先将融化的蜡放入包埋框,待蜡凝固之前将组织从脱水盒内取出按照包埋面的要求放入包埋框并贴上对应的标签。于-20°冻台冷却,蜡凝固后将蜡块从包埋框中取出并修整蜡块。
4、切片:将修整好的蜡块置于石蜡切片机上切片,片厚4μm。切片漂浮于摊片机40℃温水---组织展平,用载玻片将组织捞起,并放进60℃烘箱内烤片。待水烤干蜡烤化后取出常温保存备用。
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